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淺談蛋白保存

更新時間:2025-05-14      瀏覽次數(shù):92

作為實驗室的"打工人",相信大家都經(jīng)歷過這樣的崩潰時刻:好不容易純化出來的蛋白,放冰箱幾天后居然沉淀了!或者不同批次的蛋白活性忽高忽低,實驗數(shù)據(jù)根本沒法看...今天我們就來聊聊這個讓老師們頭疼的蛋白質(zhì)保存問題。


一、為什么蛋白質(zhì)這么"嬌氣"?

蛋白質(zhì)就像是個精致的樂高模型,靠著氫鍵、鹽鍵這些"膠水"維持著復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)。但隨便來個酸堿、高溫或者劇烈震蕩,這個模型就會散架。更氣人的是,純化后的蛋白比粗提物還要"作",動不動就變性給你看。


二、保存蛋白質(zhì)的五大黃金法則

1. 低溫保存:但別太低

- 4℃適合短期(1周內(nèi)),但記得加抗菌劑

- -20℃是常規(guī)選擇,但要注意凍融損傷

- -80℃長期保存最佳,但有些蛋白反而怕凍

小貼士:像羧肽酶這種"玻璃心"蛋白,凍一次就變性;而有些酶凍融后活性反而增強,簡直是"抖M"體質(zhì)。


2. 分裝是個技術(shù)活

- 建議50-100μl/管(土豪實驗室可以任性)

- 標記一定要清楚!別問我是怎么知道的...

- 用過的蛋白放4℃不要超過一周,對于較為重要的實驗探索,最好用新鮮配置或未經(jīng)過反復(fù)凍融的蛋白質(zhì)。


3. 濃縮才是精華

- 濃度<1mg/ml的蛋白容易“自暴自棄"(解聚或吸附)

- 疏水蛋白特別"粘人",喜歡抱管子不放

- 酶溶液至少要>1%濃度


4. 速凍速融要快準狠

- 液氮速凍較理想,干冰-乙醇浴也能湊合

- 融化時37℃水浴快速搞定

- 千萬別學我那個把蛋白放室溫慢慢融化的師弟...


5. 添加劑的選擇困難癥

緩沖液:

- pH7-8的Tris或PBS最保險

- 鹽濃度0-150mM為宜


保護劑全家桶:

- 甘油(10-50%):蛋白質(zhì)的"防凍液"

- DTT:對抗氧化損傷的"抗氧化劑"

- 蛋白酶抑制劑:防"自相殘殺"

- 疊氮鈉:有毒但有效的"防腐劑"(做動物實驗的請繞道)


三、保存方法選擇指南

1. 短期(<1周):

- 4℃+過濾除菌

- 記得定期檢查


2. 長期:

- -80℃是較好的

- 凍干保存較穩(wěn)定(但有些蛋白復(fù)溶困難)


四、來自老法師的忠告

1. 新純化的蛋白先做個小樣測試穩(wěn)定性

2. 重要蛋白建議多種條件平行保存

3. 記錄!記錄!記錄!(別問我為什么強調(diào)三遍)

4. 定期檢查保存蛋白的活性和濃度


最后提醒:沒有放之四海而皆準的保存方法,關(guān)鍵要了解你家蛋白的"脾氣"。多查文獻,多試條件,才能找到適合的保存方案。祝大家的蛋白都能"長命百歲"!


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